国产亚洲精爱浪-国产亚洲精久久久久久无码-国产亚洲精品97在线观看-国产亚洲精品aa片在线观看-国产亚洲精品a久久7777-国产亚洲精品a在线观看app

技術文章您現在的位置:首頁 > 技術文章 > 蛋白原核表達增產用的自誘導培養基工作原理

蛋白原核表達增產用的自誘導培養基工作原理

更新時間:2024-09-14   點擊次數:1089次

用于原核表達系統的自誘導培養基,該培養基能高效誘導表達外源蛋白。培養基中同時加入葡萄糖和乳糖,大腸桿菌會優先利用葡萄糖,在葡萄糖耗盡前不會誘發Iac啟動子;當葡萄糖耗盡時,乳糖發揮作用,開啟Iac啟動子誘導外源蛋白表達,而乳糖的代謝產物也同時作為細菌生長的碳源。自誘導的方法省去了監測培養基的菌密度和添加IPTG誘導蛋白表達的步驟,一方面使得實驗操作更加簡潔,另一方面避免了IPTG對細菌的毒害作用。

638368842009213961724.jpg


自誘導培養基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)產品及特點
本產品是在pET專用生長培養基的基礎上開發而成的,它利用E.coli自身對培養 基中碳源和能源的調控利用機制,實現外源蛋白在細菌達到飽和期后的自動誘發。
具有下列特點:
1. 不需添加任何IPTG或相關誘導物,節約成本。
2. 免去了密切監控菌液密度的過程,尤其適合大規模篩選 。
3. 細菌生長密度遠高于IPTG誘導表達系統 。
4. 外源蛋白表達量遠遠高于IPTG誘導表達系統。
5. 本產品即開即用,操作簡單 。
6. 與各種細胞培養容器兼容(如培養瓶、培養罐、深孔管、發酵罐等)。
自誘導培養基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)使用及效果
用本產品以及LB+IPTG誘導培養細菌獲得的外源蛋白表達量比較

自誘導培養基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)操作步驟

(一)獲得目的基因

1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環獲得所需基因片段。

2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉錄形成cDNA第一鏈,以逆轉錄產物為模板進行PCR循環獲得產物。

(二)構建重組表達載體

1、自誘導培養基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)載體酶切:將表達質粒用限制性內切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。

2、PCR產物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。

(三)  獲得含重組表達質粒的表達菌種

1、 將連接產物轉化大腸桿菌DH5α,根據重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質粒,雙酶切初步鑒定。

2、 測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。

3、 以此重組質粒DNA轉化表達宿主菌的感受態細胞。

(四)誘導表達

1、 自誘導培養基(lac啟動子)(Auto-induction Medium)挑取含重組質粒的菌體單斑至2ml LB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養。

2、按1∶50比例稀釋過夜菌,一般將1ml菌加入到含50mlLB培養基的300ml培養瓶中, 37℃震蕩培養至OD600≌0.4-1.0(*0.6,大約需3hr)。

3、取部分液體作為未誘導的對照組,余下的加入IPTG誘導劑至終濃度0.4mM作為實驗組,兩組繼續37℃震蕩培養3hr。

4、分別取菌體1ml, 離心12000g×30s收獲沉淀,用100μl 1%SDS重懸,混勻, 70℃10min。

5、離心12000g×1min,取上清作為樣品,可做SDS-PAGE等分析。

靶點科技(北京)有限公司

靶點科技(北京)有限公司

地址:中關村生命科學園北清創意園2-4樓2層

© 2025 版權所有:靶點科技(北京)有限公司  備案號:京ICP備18027329號-2  總訪問量:318996  站點地圖  技術支持:化工儀器網  管理登陸

主站蜘蛛池模板: 亚洲va成无码人在线观看 | 午夜影院国产理伦理片 | 国产精品亚洲影院久久久久 | 丰满肥臀大屁股熟妇激情 | 日本很黄的打屁股网站免费 | 亚洲色婷婷五月天在线观看 | 亚洲欧美精品伊人久久 | 国产精品自产拍在线观看在55 | 高清偷自拍第1页 | 日本在线www| 91免费国产视频久久久 | 国产www尤物精品在线观看 | 高潮少妇白浆久久久久久久 | 日韩成人一区在线观看 | 亚洲中文字幕日 | 国产国产一级无码秋霞影院 | 国片精品jk制服丝袜 | 女被男啪到哭的视频网站 | 亚洲精品乱码久久久久久自慰 | 午夜福利在线观看不卡顿 | 国产系列丝袜熟女精品网站 | 国产午夜福利不卡在线观看视频 | 99精品久久久久久久婷婷 | 亚洲成人黄片在线免费观看 | 久久国产精品99精品国产不卡 | 一级特黄录像免费播放中文版 | 蜜桃91丨九色丨蝌蚪 | 亚洲av无码专区在线看 | 亚洲国产在线精品国自产拍 | 日本漫画人物拔萝卜打扑克 | 日本阿v视频在线观看高清 日本啊在线观看 | 精品国产91乱码一区二区三区 | 日韩中文字幕在线播放 | 中文字幕免费在线观看 | 国产精品日韩欧美在线 | 国产农村妇女精品 | 人人操aⅴ| 最新日韩午夜在线电影 | 日韩精品极 | 成人综合色在线观看网站 | 日韩高跟视频一区二区三区 |